拟南芥PKA催化亚基基因的克隆、原核表达及其催化活性的鉴定

• 作者: 刘璞 张会霞 王学臣 陈珈
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: cAMP依赖蛋白激酶 融合表达 活性测定
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 发育与分子生物学
• 页码范围: 460-465
• 页数: 6页
• 分类号: Q943.2
• 字数: 1275字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2003.04.013

摘要

蛋白质的磷酸化与脱磷酸化是生物体内存在的一种普遍的调节方式,几乎参与所有的生命活动过程.利用Blast 2.0分析拟南芥基因组序列发现存在一个与动物蛋白激酶cDNA同源性的序列,在GenBank中比较发现它与动物的依赖cAMP的蛋白激酶(PKA)的催化亚基(C亚基)有相似的特征序列.提取拟南芥(Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.)的总RNA,通过RT-PCR克隆得到这一cDNA片段,经序列测定证实它具有完整的阅读框架,将其克隆至pET30a原核表达载体,结果表明在大肠杆菌(E. coli) BL21 (DE3)中该表达质粒在IPTG诱导下表达产生大量带寡聚组氨酸标记的重组蛋白, 该蛋白在37 ℃表达时主要以包含体形式存在, 而在22 ℃表达时主要以可溶性蛋白形式存在.经过与组氨酸结合金属螯合树脂亲和柱层析纯化后, 得到纯化的目的蛋白, 其纯度达到87%以上.活性鉴定表明其具有依赖于cAMP的蛋白激酶活性,而加入PKA的抑制剂(H-8)后,其活性显著下降.从而证实它确实是拟南芥的PKA催化亚基.Western blot结果显示它几乎不受ABA、NaCl等逆境的诱导.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈珈	中国农业大学生物学院植物生理生化国家重点实验室	29	342	11.0	17.0
2	王学臣	中国农业大学生物学院植物生理生化国家重点实验室	58	1404	18.0	36.0
3	刘璞	中国农业大学生物学院植物生理生化国家重点实验室	2	14	1.0	2.0
4	张会霞	中国农业大学生物学院植物生理生化国家重点实验室	2	14	1.0	2.0