GDA2基因的克隆、原核表达与融合蛋白的纯化

• 作者: 朱玉贤 白勇 苏力坦·阿巴白克力
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: GDA2 衰老 原核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: Q94
• 字数: 3345字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2003.01.002

摘要

GDA2(G2 pea dark accumulated gene)是与G2豌豆(Pisum sativum L.)短日照条件下不衰老现象紧密相关的基因之一.实验用cDNA差示分析法(representational difference analysis,RDA)得到一个短日照下特异表达的G2豌豆cDNA,并命名为GDA2.核酸序列分析表明,该cDNA全长1 120 bp,最大的开放阅读框为642 bp,编码一个由213个氨基酸构成的分子量约为24 kD的蛋白质,与GDA1的同源性为36%.在GDA2的cDNA两端分别引入BglⅡ与XhoⅠ的酶切位点,用PCR方法将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切筛选和测序鉴定,得到所需的表达载体pGEX-GDA2.将pGEX-GDA2导入E.coli BL21菌株,经IPTG诱导,得到分子量约51 kD的GST-GDA2融合蛋白,并利用Glutathione Sepharose 4B亲和柱对该融合蛋白加以纯化.GDA2-GST融合蛋白的表达和纯化工作,为深入研究GDA2蛋白的结构与功能以及该基因同衰老的关系打下良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱玉贤	北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室	53	478	14.0	19.0
2	白勇	北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室	10	146	6.0	10.0