重组大鼠肾胆绿素还原酶在大肠杆菌中表达和纯化方法的研究

• 作者: 刘明 吕昌莲 周宏博 周虹 尹珅 王秀宏 申峰
• 来源期刊: 哈尔滨医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 胆绿素还原酶 表达 纯化 大鼠
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 3-6
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3301字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1905.2003.01.002

摘要

目的确定重组大鼠肾胆绿素还原酶在大肠杆菌中的表达条件及纯化方法.方法将已构建的大鼠肾胆绿素还原酶(BVR)的重组质粒pMW172a-BVR转入大肠杆菌BL-21,分析不同温度、摇床转速对BVR表达的影响,确定可溶性表达最佳条件.使用超速离心、盐析、层析的方法纯化BVR.检测酶活性.结果确定了BVR可溶性表达最佳条件为37℃(120±5)r/min;确定了BVR具体纯化路线.所得蛋白纯度为92.2%、纯化倍数为4.3倍、回收率为19.8%的活性BVR蛋白.结论获得了纯度高、具有活性的BVR蛋白,可作为工具酶用于某些相关酶的研究,也为进一步进行BVR结构与功能之间关系的研究提供了可行的纯化路线.