卡地腐霉Pr1蛋白酶cDNA片段的分离和克隆

• 作者: 施晓鋆 苏晓庆
• 来源期刊: 贵阳医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 灭蚊 真菌 害虫防治,生物学 cDNA 卡地腐霉 枯草杆菌蛋白酶类蛋白酶 简并引物
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: Q55|R184.3
• 字数: 3369字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2707.2003.01.001

摘要

目的:分离和克隆灭蚊真菌卡地腐霉(Pythium carolinianum)Pr1蛋白酶(subtilisin-like protease)的cDNA片段.方法:用1%的几丁质悬液诱导培养卡地腐霉菌丝30h,然后按下述流程操作:抽提菌丝的总RNA;逆转录合成cDNA第一链;根据Pr1的保守氨基酸序列设计合成一对简并引物,以cDNA第一链为模板,用MOPAC方法(Mixed oligonucleotides primed amplification of cDNA)扩增cDNA;将扩增产物纯化、连入pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α用于测序.结果:所获片段中,1个530bp的cDNA片段与枯草杆菌类蛋白酶基因有较高的相似性,尤其与真菌Aphanomyces astaci(卵菌纲、水霉目)的Pr1在核苷酸序列及翻译得到的氨基酸序列水平有较高的相似性,分别为59%和49%.此序列已登录Genbank数据库,检索号:AF499006.P. carolinianum与A. astaci Pr1部分cDNA序列的比对亦登录Genbank数据库,检索号:AY094976,AY094977.结论:这一DNA片段可能是卡地腐霉Pr1蛋白酶的一条cDNA片段.更进一步的工作是设法获得全长cDNA片段,并加以证实.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施晓鋆	贵阳医学院生物学教研室	2	5	1.0	2.0
2	苏晓庆	贵阳市妇幼保健院生殖遗传科	1	5	1.0	1.0