家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化

• 作者: 于迎春 刘颖 方梅霞 施振旦 邵西兵 陈楠
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡Leptin 基因克隆 蛋白表达和纯化
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 258-260
• 页数: 3页
• 分类号: S831.3|Q78
• 字数: 3309字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.2004.03.018

摘要

从18周龄鸡卵巢组织中抽提总RNA,使用六聚体随机引物反转录后,用鸡Leptin(瘦素)特异性引物扩增出鸡Leptin编码区第52～460 bp的长度为409 bp的cDNA片段.根据鸡Leptin的3'端第460～492 bp序列设计了3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物,并在最后1条引物3'端连接上EcoR I切点;在以上用于反转录扩增的5'端引物的5'端连接一BamH I切点.用该5'端引物分别与3个3'端引物配对,利用反转录扩增出的409 bp的Leptin cDNA片段作为第1模板进行扩增,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增.经3次扩增得到编码鸡Lep-tin成熟肽的全长451 bp的cDNA序列.将该451 bp的Leptin cDNA序列经BamH I和EcoR I双酶切后,克隆入表达质粒pRSET A的BamH I和EcoR I两酶切位点之间,构建成表达质粒pLep-SCAU.转化有重组表达质粒pLep-SCAU的大肠杆菌BL21(DE3)在LB培养基中培养后,经IPTG诱导表达出相对分子质量为20 100的鸡Leptin融合蛋白和少量40 200的Leptin融合蛋白.Leptin融合蛋白的表达在IPTG浓度为0.05 mmol/L时达到最高,占总菌体蛋白的32.6%.用Ni-NTA凝胶从7 L发酵培养菌裂解液中纯化出180 mg左右的Leptin融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方梅霞	华南农业大学动物科学学院	11	102	6.0	10.0
2	施振旦	华南农业大学动物科学学院	76	873	18.0	24.0
3	刘颖	华南农业大学动物科学学院	42	207	8.0	12.0
4	于迎春	华南农业大学动物科学学院	6	73	4.0	6.0
5	陈楠	华南农业大学动物科学学院	5	42	2.0	5.0
6	邵西兵	华南农业大学动物科学学院	8	68	4.0	8.0