茶树咖啡碱合酶cDNA在大肠杆菌中的表达

• 作者: 余有本 宛晓春 李叶云 江昌俊 王朝霞
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 咖啡碱合酶cDNA 大肠杆菌 表达
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 页码范围: 105-109
• 页数: 5页
• 分类号: S571.101
• 字数: 3395字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-2030.2004.04.024

摘要

通过RT-PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶(TCS)cDNA编码区全序列,并将其克隆到表达载体pET 32a(+)中,得到重组质粒pET-TCS,在表达宿主菌BL21trxB(DE3)中高效表达,产生相对分子质量约为62 000的融合蛋白.该融合蛋白包括112个氨基酸残基的硫氧还原蛋白及370个氨基酸残基的茶树TCS蛋白.实验结果表明,随着诱导时间的延长,表达的融合蛋白产量逐渐增加,表达蛋白总量最高可达到菌体总蛋白的39.14%;在15、25和37 ℃ 3个不同的诱导温度下,均能诱导产生融合蛋白,而且产生的总量及其可溶性部分所占比例均随诱导温度升高而增加;在菌体的各个部位中,融合蛋白主要在细胞质中以可溶的形式进行表达,有少量在外周质中表达或以包涵体形式在细胞质中表达.另外,体外酶促反应表明,表达的融合蛋白能催化可可碱甲基化生成咖啡碱,具有正常的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余有本	安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室	9	559	8.0	9.0
2	江昌俊	安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室	104	1931	22.0	40.0
3	王朝霞		1	17	1.0	1.0
4	李叶云	安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室	51	584	14.0	22.0
5	宛晓春	安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室	162	3012	29.0	46.0