结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达载体的构建及蛋白表达的鉴定

• 作者: 吴悦涵 张会东 曾献武 朱庆平 赵明才 鲍朗 龙洋
• 来源期刊: 中国呼吸与危重监护杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 早期分泌性抗原靶 真核表达质粒 表达蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 其他
• 页码范围: 181-184
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3291字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6205.2004.03.017

摘要

目的克隆并表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6的编码基因,为研究其免疫功能奠定基础.方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板,用PCR对ESAT-6基因进行扩增,扩增产物克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)中.对重组表达载体pcDNA-ESAT-6进行酶切、PCR及测序鉴定.经鉴定无误的重组质粒用DEAE-葡聚糖法转染COS-7细胞48 h后,用Trizol法提取转染细胞总RNA进行RT-PCR鉴定.结果重组质粒pcDNA-ESAT-6构建成功,并能在COS-7细胞中有效表达.结论结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6真核重组表达质粒pcDNA-ESAT-6构建成功,为进一步研究ESAT-6和CFP-10的免疫原性、免疫保护性及其二者之间的相互作用奠定了基础.