问号钩端螺旋体血清群LipL41基因型分析及其表达产物的免疫学鉴定

• 作者: 丁威 严杰 毛亚飞
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 问号钩端螺旋体 LipL41基因 基因型 克隆表达 免疫原性鉴定 免疫保护
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 859-865
• 页数: 7页
• 分类号: R3
• 字数: 4228字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.11.007

摘要

目的确定我国15群15株问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株和2群2株双曲钩体国际标准株携带LipL41基因情况,构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫原性. 方法常规酚-氯仿法提取上述17株钩体基因组DNA,高保真PCR扩增全长LipL41基因片段,T-A克隆后测序分型.构建LipL41基因原核表达系统,SDS-PAGE检测重组目的蛋白(rLipL41)表达情况.分别用钩体属特异性TR/patocⅠ抗原、rLipL41兔抗血清的Western blot鉴定其免疫反应性和抗原性.分别用显微镜凝集试验(MAT)、钩体黏附J774A.1细胞模型检测兔抗rLipL41血清的交叉凝集效价和黏附阻断作用. 结果 15株问号钩体均有LipL41基因,并可分为LipL41/1和LipL41/2两种基因型,2株双曲钩体则否.11个LipL41/1基因和4个LipL41/2基因克隆之间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为88.61%～88.67%和93.24%～97.18%.所构建的原核表达系统rLipL41/1和rLipL41/2的表达量分别占钩体总蛋白的30%和40%.rLipL41/1和rLipL41/2均能与TR/patocⅠ抗血清发生结合反应,免疫家兔能产生抗体.rLipL41/1和rLipL41/2兔抗血清对上述15株问号钩体MAT效价为1∶8～1∶128、1∶16～1∶256稀释时均能有效地阻断钩体对细胞的黏附. 结论我国主要的15群问号钩体代表株均有LipL41/1或LipL41/2基因.所构建原核表达系统能高效表达rLipL41/1和rLipL41/2.rLipL41/1和rLipL41/2是具有良好抗原性和免疫反应性、广泛存在于不同血清群问号钩体表面的蛋白抗原.