t-PA基因克隆及pcDNA3.1t-PA真核表达质粒的构建

• 作者: 冯虎翼 吴忠均 高根五
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因克隆 组织纤溶酶原激活物 真核表达质粒载体
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 76-78
• 页数: 3页
• 分类号: Q785
• 字数: 2498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2004.01.034

摘要

目的利用基因工程技术克隆组织纤溶酶原激活物(t-PA)基因并构建一种无细胞毒性、不激活原癌基因的真核表达的pcDNA3.1t-PA质粒载体.方法采用高效Trizol试剂快速从人肺组织中提取RNA,RT-PCR获得t-PA cDNA,扩增、纯化、回收t-PA基因片段并将质粒pcDNA3.1和t-PA基因片段分别双酶切,前者纯化回收大片段,后者纯化回收1.9kb片段,再将回收的pcDNA3.1大片段与t-PA基因片段(1.9kb)重组.对重组pcDNA3.1t-PA质粒进行单酶切和双酶切鉴定,并测序.结果成功地从胎儿肺组织中克隆了t-PA基因,并构建了以pcDNA3.1为载体的真核表达质粒载体.结论含t-PA基因新型表达质粒构建的成功将为基因防治血管重建术中局部血栓形成奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯虎翼	重庆医科大学附属第二医院血管外科	9	35	4.0	5.0
2	高根五	重庆医科大学附属第二医院血管外科	60	497	13.0	20.0
3	吴忠均	重庆医科大学附属第一医院血管研究中心	62	221	7.0	12.0