问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及其应用

• 作者: 严杰 李淑萍 李立伟 毛亚飞 罗依惠 罗冬娇
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体,问号 lipL32基因 lipL41基因 序列同源性,核酸 序列同源性,氨基酸 基因表达 克隆,分子 lipL32/1-lipL41/1融合基因/免疫学
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: R377|Q784
• 字数: 4205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.006

摘要

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统,了解钩体野生株lipL32和lipL41基因携带和表达情况及钩体患者的血清抗体水平.方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/1融合基因,常规方法构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达情况.采用Western blot鉴定rLipL32/1- rLipL41/1的免疫原性.采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株lipL32和lipL41基因及其表达情况.采用ELISA检测228例钩体患者血清lipL32和lipL41基因产物的抗体.结果:与报道的相关序列比较,lipL32/1-lipL41/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9%和99.8%.目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达产量约为细菌总蛋白的10%,主要以包涵体形式存在.rLipL32/1和rLipL41/1兔抗血清均能与rLipL32/1-rLipL41/1结合.97.9%和87.6%问号钩体野生株分别有lipL32和lipL41基因.95.9%和84.5%问号钩体野生株分别与rLipL32s和rLipL41s兔抗血清出现效价,为1:4～1:128的MAT阳性结果.分别有94.7%～97.4%和78.5%～84.6%患者血清rLipL32s和rLipL41s抗体阳性.结论:本研究成功地构建了lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统,所表达的产物具有良好的免疫原性.lipL32和lipL41是广泛存在于不同血清群问号钩体并有较高表达率的基因,且其不同基因型的表达产物有交叉抗原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
2	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
3	李立伟	浙江大学医学院病原生物学教研室	34	277	7.0	15.0
4	李淑萍	浙江大学医学院病原生物学教研室	16	109	6.0	10.0
5	罗冬娇	浙江大学医学院病原生物学教研室	52	209	9.0	11.0
7	罗依惠	浙江大学医学院病原生物学教研室	14	68	6.0	7.0