耐碱性甘露聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

• 作者: 武玉永 蒋思婧 谭秀华 马立新
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甘露聚糖酶 克隆 毕赤酵母 表达 酶活
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 543-546
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3089字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2005.04.012

摘要

通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株.构建其基因组文库,从中筛选到甘露聚糖酶基因TM1并测序分析,用BLAST分析表明,TM1的氨基酸序列与其他在GenBank发表的甘露聚糖酶的氨基酸序列的同源性均低于60%,故确定其为一个新的甘露聚糖酶基因(GenBank登录号为AY623903).将此基因去除信号肽后的编码序列克隆到表达载体pHBM905C上,得到重组质粒pHBM1201.经SalⅠ酶切后分别转化毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71、GS115、SMD1168,得到分泌表达的重组毕赤酵母.挑选相对表达量最高的重组毕赤酵母SMD1168-3在摇瓶中诱导产酶,对该酶的粗酶进行酶学性质分析表明,其最适反应温度为55℃,最适PH值为7.5,以魔芋粉为底物所测得的最高酶活为41.8U,半衰期为1h,在80℃保温5min其酶活由最初酶活的77%下降到11%,温度下降到55℃后活性可恢复到最初酶活的60%以上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马立新	湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室	77	616	14.0	21.0
2	武玉永	滨州医学院细胞生物学教研室	31	101	6.0	8.0
3	蒋思婧	湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室	23	149	7.0	11.0
4	谭秀华	湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室	1	24	1.0	1.0