构建T载体用于PCR克隆

• 作者: 周莉 马琪 马立新
• 来源期刊: 湖北大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: T载体 甘露聚糖酶基因 DNA克隆 PCR
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 162-165
• 页数: 4页
• 分类号: Q756
• 字数: 2183字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2375.2005.02.018

摘要

通过克隆甘露聚糖酶基因到pMD-18T载体构建了质粒pMD-18Tman2XcmI,克隆的甘露聚糖酶基因两侧各引进了一个特定的XcmI 酶切位点;用XcmI酶切质粒pMD-18Tman2XcmI可以制备T载体.因为甘露聚糖酶基因作为填充片段和筛选标记受半乳糖苷酶基因启动子的控制,甘露聚糖酶能够表达,从而水解甘露聚糖产生水解圈,指示转化了部分酶切质粒的背景菌落.此外,在甘露聚糖酶基因中存在第3个不同序列的XcmI酶切位点,因此残余的甘露聚糖酶基因引起的背景可以进一步降低.抽提大量质粒贮存,随时制备T载体使用,增加了克隆的稳定性.该T载体克服了一般T载体质量不稳定,费钱,克隆效率低,假阳性高的缺点.使用构建的T载体完成了10个基因的克隆,结果表明重组效率达到了90%～100%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马立新	湖北大学生命科学学院	77	616	14.0	21.0
2	周莉	湖北大学生命科学学院	17	60	5.0	7.0
3	马琪	湖北大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0