重组刺桐胰蛋白酶抑制剂的制备及活性鉴定

• 作者: 刘建宁 孙自勇 陈均勇 马志峰
• 来源期刊: 南京大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI) 胰蛋白酶 瑞替普酶 纤溶酶 抑制
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 分子医学研究专栏
• 页码范围: 462-469
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 565字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0469-5097.2005.05.002

摘要

刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,能够抑制胰蛋白酶及组织型纤溶酶原激活剂的活性,因此ETI可以作为配体与固定相偶联用于亲和层析.利用化学合成及聚合酶链式反应(PCR)的方法获得ETI的编码基因,然后用NdeⅠ/SacⅠ酶切并插入载体pET25b(+)中构建重组表达质粒pET25b(+)/ETI.重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导使重组ETI(rETI)过量表达形成包涵体.包涵体经过洗涤、复性及CM离子交换柱纯化,每升培养液可获得14 mg rETI,其纯度超过92%.活性测定表明,rETI对凝血酶及尿激酶的活性没有抑制作用,但能显著抑制胰蛋白酶、瑞替普酶及纤溶酶的活性,抑制常数Ki分别为5.14×10-9,9.4×10-8和2.08×10-8mol/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘建宁	南京大学分子医学研究所	31	169	7.0	12.0
2	孙自勇	南京大学分子医学研究所	17	93	6.0	9.0
3	马志峰	南京大学分子医学研究所	2	3	1.0	1.0
4	陈均勇	南京大学分子医学研究所	8	38	3.0	6.0