北京长白杂交猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建

• 作者: 夏春 崔保安 崔沛 李云岗 李新生 陈红英 高凤山
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪IgG H链基因 CH2和CH3 基因克隆 DNA序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: S813
• 字数: 3805字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2340.2006.01.001

摘要

根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含Kpn Ⅰ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2-CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2-CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2-CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2-CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2-CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈红英	河南农业大学牧医工程学院	168	646	12.0	16.0
2	崔保安	河南农业大学牧医工程学院	274	2313	25.0	33.0
3	李新生	中国农业大学动物医学院	106	527	14.0	18.0
7	夏春	中国农业大学动物医学院	68	1187	22.0	31.0
8	李云岗	中国农业大学动物医学院	10	57	5.0	7.0
9	高凤山	中国农业大学动物医学院	10	57	5.0	7.0