重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定

• 作者: 吴娜 张长弓 王臻 谢莲英 颜江华
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 瘦素 基因构建 表达 细胞存活率
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 779-783
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4233字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2006.05.014

摘要

根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列,设计并合成了6个89bp左右的DNA小片段,经重叠延伸PCR扩增获得464bp的rhLep的完整基因片段.构建pET22b(+)/rhLep表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%以上.表达产物用Ni2+亲和层析柱纯化,SDS-PAGE结果表明,含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD.MTT比色法实验显示,当低剂量(10～30ng/mL)时,rhLep具有促进内皮细胞生长的作用;在高剂量(50～225ng/mL)时,rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性.其最大杀伤率达到98.8%.吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用.以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张长弓	厦门大学医学院抗癌研究中心	22	274	9.0	16.0
2	颜江华	厦门大学医学院抗癌研究中心	59	282	10.0	14.0
3	吴娜	厦门大学生命科学学院	5	19	3.0	4.0
4	王臻	厦门大学生命科学学院	7	14	2.0	3.0
5	谢莲英	厦门大学生命科学学院	4	12	2.0	3.0