重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定

• 作者: 单永强 周骋 曾沃坦 王晓霞 陈小军 黄炜
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 瘦素 重组融合蛋白质类 大肠杆菌 低温 免疫活性 自诱导 表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 443-446,451
• 页数: 5页
• 分类号: Q517
• 字数: 4834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.05.012

摘要

目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白.方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-T easy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达.用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物.对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白.用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性.结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白.Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性.结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈小军		3	9	2.0	3.0
2	曾沃坦		4	20	3.0	4.0
6	单永强		1	4	1.0	1.0
7	王晓霞		1	4	1.0	1.0
8	黄炜		1	4	1.0	1.0
9	周骋		2	4	1.0	2.0