乳酸片球菌L-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张黎 陈发忠 韦宇拓 黄彦 黄日波
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 工学
• 关键词: L-乳酸 L-乳酸脱氢酶 乳酸片球菌 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 68-71
• 页数: 4页
• 分类号: TQ921.3|Q78
• 字数: 3409字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1006-687X.2006.01.016

摘要

与其它微生物相比,用大肠杆菌进行发酵生产乳酸有许多优势,但大肠杆菌没有L-乳酸脱氢酶基因,不能利用糖发酵生产L-乳酸.本文采用PCR技术,以乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)基因组DNA为模板,克隆得到L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase)基因,将该基因的ORF连接到表达质粒pET-22b(+),获得重组质粒pET-ldhL.将pET-ldhL质粒转化大肠杆菌BL21株,实现了ldhL基因的表达;对含有ldhL基因的重组菌株进行表达研究,在30℃以IPTG诱导8h后,SDS-PAGE分析可见明显特异性条带,酶活力达到6.49 u/mL,是野生菌酶活力(2.82u/mL)的2.3倍.对重组表达的L-乳酸脱氢酶生物学特性研究显示,它们的最适反应温度为27～30℃,最适反应pH为5.0～5.3.图5参15