创伤弧菌vvhA基因的克隆、原核表达系统的构建及鉴定

• 作者: 严杰 应斌宇 张家敏 楼永良
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 创伤弧菌 溶细胞素/vvhA基因 克隆 原核表达/提纯 免疫性
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 460-462
• 页数: 3页
• 分类号: R378.3
• 字数: 2859字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-376X.2006.06.015

摘要

目的 克隆创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)溶细胞素基因(vvhA),构建原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性.方法 采用PCR技术从Vv GTC333和WZ01株DNA中扩增全长vvhA基因,T-A克隆后测定其核苷酸序列.采用pET32a质粒构建vvhA基因原核表达载体,在E coli BL21(DE3)宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导目的重组蛋白rVvhA表达,采用Ni-NTA亲和层析法提纯rVvhA,SDS-PAGE检测表达和提纯效果.采用兔抗Vv全菌抗体的Western Blot和兔抗rVvhA血清的免疫扩散试验鉴定其免疫反应性和免疫原性.结果 所克隆的vvhA基因核苷酸序列与GeneBank公布的同源性分别为96.09%和98.26%.在0.5 mmol/L IPTG诱导下,rVvhA产量可占细菌总蛋白的18%.提纯的rVvhA经SDS-PAGE后仅显示单一的蛋白条带.重组蛋白rVvhA能与兔抗Vv全菌抗体发生特异性结合,免疫家兔可获得高效价抗体.结论 该研究成功地构建了创伤弧菌vvhA基因高效原核表达系统,所表达的rVvhA具有良好的免疫原性和免疫反应性,可作为Vv免疫检测试剂盒及疫苗的抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	楼永良		57	229	8.0	12.0
2	应斌宇		72	399	10.0	16.0
3	严杰	浙江大学医学院	265	1149	14.0	20.0
4	张家敏		13	56	4.0	7.0