BAC5-scFv的表达、复性及活性检测

• 作者: 刘长征 吴涛 唐彩华 梁昌盛 肖锡宾
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 包涵体 单链抗体 复性 鼻咽癌
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 67-70
• 页数: 4页
• 分类号: R739.63
• 字数: 3318字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.01.020

摘要

目的:探讨以包涵体形式表达的抗鼻咽癌单克隆抗体(mAb)BAC5的单链抗体(BAC5-scFv)的纯化、复性方法,并对其活性进行检测.方法:扩增pET-22b-scFv质粒转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株,培养、破菌后,分离和变性包涵体,用Ni-NTA His Bind层析柱纯化变性的scFv.经稀释、透析及尿素梯度凝胶层析柱3种方法进行复性.用细胞免疫组化染色和蛋白印迹法(Western blot),鉴定复性后的BAC5-scFv的免疫活性.结果:Ni-NTA His Bind亲和层析柱能有效纯化变性的scFv.以尿素梯度凝胶层析柱复性的蛋白回收率最高.免疫细胞化学染色法检测及Western blot分析证实,复性后的BAC5-scFv可与CNE2细胞上的抗原特异性结合.结论:以包涵体形式表达的BAC5-scFv经变性、纯化及复性后,获得良好的免疫活性,为大量制备具有活性的BAC5-scFv,并用于鼻咽癌的放射免疫显像和治疗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁昌盛	中山大学基础医学院实验核医学教研室	33	153	6.0	11.0
2	吴涛	中山大学基础医学院实验核医学教研室	49	371	11.0	16.0
3	唐彩华	中山大学基础医学院实验核医学教研室	28	95	6.0	8.0
4	肖锡宾	中山大学肿瘤防治中心实验研究部	14	124	7.0	11.0
5	刘长征	中山大学基础医学院实验核医学教研室	27	123	7.0	9.0