水牛朊蛋白成熟片段基因的克隆与原核表达

• 作者: 刘海生 刘雨田 吴晓东 王志亮 袁志栋 赵永刚
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 水牛成熟PrP 克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 2590-2596
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 字数: 4510字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2006.12.027

摘要

[目的]克隆、分析水牛朊蛋白(prion protein,PrP)成熟片段基因,并获取纯化的表达产物.[方法]将应用PCR技术扩增的水牛成熟PrP的核酸序列克隆到表达载体pET-32a,并分析其序列;把阳性克隆质粒pET-32a-BPrP转化表达菌BL21(DE3),鉴定纯化的表达产物.[结果]水牛朊蛋白成熟片段核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其他牛科动物的成熟PrP核酸、氨基酸序列间的相似性分别在97.1%和97.2%以上,并且发现水牛成熟PrP有5个重复序列,编码的氨基酸序列其中有2个九肽和3个八肽重复序列.具有较高的表达水平的PrP融合蛋白被纯化后,用Western印迹实验证明该蛋白具有PrP抗原活性.[结论]首次报道了克隆、分析水牛朊蛋白成熟片段基因,发现水牛成熟PrP有5个重复序列,并获得了具PrP抗原活性的水牛成熟PrP融合蛋白.