融合蛋白TAT-HIF-1α-PAS-B原核表达载体的构建、表达及纯化

• 作者: 戚华兵 汪仕良 王凤君
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 原核表达系统 TAT蛋白转导结构域 缺氧诱导因子1α PAS-B结构域
• 年，卷（期）: 2006,（22）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2213-2215
• 页数: 3页
• 分类号: Q503|Q51|Q782
• 字数: 3458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.22.003

摘要

目的 构建蛋白转导结构域TAT和人缺氧诱导因子1α PAS-B结构域融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化.方法 分别构建原核表达质粒pTAT-PAS-B、pET-PAS-B和pTAT-EGFP;在大肠杆菌BL21(DE3)pLyss内,以IPTG诱导融合蛋白的表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定,利用镍-亚硝胺乙酸-组氨酸(NiNTA-His)亲和层析法对重组蛋白进行纯化.结果 成功构建了PAS-B结构域的原核表达载体,经过优化表达和纯化条件,融合蛋白在IPTG诱导下获得特异性表达,纯化得到了高纯度的目的蛋白.结论 含人缺氧诱导因子1αPAS-B和TAT结构域融合蛋白的成功表达及纯化,为应用该融合蛋白调控体内HIF-1α的活性奠定了基础.