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摘要:
目的克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)lpp20基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗保护性抗原奠定基础.方法用PCR方法从临床分离株9806的染色体DNA中扩增出lpp20基因片段,将目的基因插入表达载体pET22b中,重组载体pET22b-Lpp20经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌E. coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达.采用镍离子亲和层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果PCR扩增的lpp20基因长度为528bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因片段与GenBank公布的序列相似性达99%,SDS-PAGE显示,经IPTG诱导目的蛋白占总蛋白的19.7%,纯化后,蛋白纯度达80%以上.Western blot检测该蛋白与兔抗Hp的多克隆抗血清发生结合反应.结论成功构建了lpp20表达载体pET22b-Lpp20,并在大肠杆菌中表达.
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文献信息
篇名 幽门螺杆菌疫苗候选抗原lpp20基因的克隆表达及其纯化研究
来源期刊 第三军医大学学报 学科 医学
关键词 幽门螺杆菌 lpp20基因 克隆
年,卷(期) 2006,(14) 所属期刊栏目 基础医学
研究方向 页码范围 1499-1501
页数 3页 分类号 R378.99|R392.13|R392.7
字数 3594字 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.14.015
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研究主题发展历程
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幽门螺杆菌
lpp20基因
克隆
研究起点
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相关学者/机构
期刊影响力
第三军医大学学报
半月刊
1000-5404
50-1126/R
大16开
重庆市沙坪坝区高滩岩30号
78-91
1979
chi
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97850
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