人类扭转蛋白A的基因克隆、表达与蛋白质纯化(Ⅰ)——DYT1基因克隆与原核表达

• 作者: 周雪莹
• 来源期刊: 烟台大学学报（自然科学与工程版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人扭转蛋白A DYT1基因 cDNA 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 页码范围: 263-268
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4784字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8820.2007.04.008

摘要

通过基因工程方法,用大肠杆菌原核表达系统表达人扭转蛋白A.从该蛋白编码序列中设计引物,以人肝cDNA文库作模板扩增到编码该蛋白的基因片段.将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到JM109大肠杆菌中,从转化平板上挑出菌落,用碱裂解法提取质粒,通过PCR和酶切分析,筛选到阳性克隆,测序结果与文献报道结果一致.提取质粒,用BamHI和XhoI酶切,回收目的片段,分别克隆到原核表达载体pET28a(+)和pGEX6P-1中,转化JM109受体菌,从JM109受体菌中提出质粒,再转化到BL21(DE3)菌中,筛选出阳性克隆,构建了人扭转蛋白A原核表达载体.IPTG诱导该工程菌,培养并离心收集.SDS-PAGE结果表明该蛋白在两种载体中均得到了高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周雪莹	大连理工大学生命科学与工程系	28	160	8.0	11.0