隐源性肝炎相关新基因CHBP2的原核表达及蛋白纯化

• 作者: 叶进 李国力 李锟 洪源 肖凡 魏红山
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 隐源性肝炎 CHBP2 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2007,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2394-2398
• 页数: 5页
• 分类号: R5
• 字数: 3569字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2007.22.005

摘要

目的:构建隐源性肝炎相关新基因CHBP2原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,并纯化CHBP2融合蛋白.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的Huh7细胞mRNA为模板,扩增获得CHBP2基因片段,连接到pGEM-T载体,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2,转化大肠杆菌BL21,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得CHBP2融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实蛋白表达的特异性.超声破碎表达细菌,SDS-PAGE分析.利用镍离子亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.结果:成功构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2,并将CHBP2融合蛋白成功表达,通过Western blot免疫印迹,证实了蛋白表达的特异性.SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达,并对蛋白成功进行了纯化和复性,获得了表达蛋白的纯品.结论:成功表达、纯化CHBP2蛋白,为研究CHBP2蛋白的生物学功能打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶进	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	49	174	7.0	10.0
2	洪源	北京地坛医院传染病研究室	44	70	5.0	6.0
3	魏红山	北京地坛医院传染病研究室	44	264	10.0	15.0
4	肖凡	北京地坛医院传染病研究室	11	22	2.0	4.0
5	李锟	华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科	3	10	1.0	3.0
6	李国力	北京地坛医院传染病研究室	11	29	2.0	5.0