刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中表达及在tPA纯化中的应用

• 作者: 占志 朱美财 王雅静 蔡庆
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 刺桐胰蛋白酶抑制剂 突变体 组织纤溶酶原激活剂 基因克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 802-806
• 页数: 5页
• 分类号: Q789
• 字数: 3714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.11.003

摘要

目的 构建刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体(rserETI)原核表达载体,制备表达产物,用于tPA的纯化.方法 设计合成rserETI编码序列DNA片段,以PCR法扩增出全长编码区序列,经酶切后克隆至pET9a表达载体,转化大肠杆菌JM109DE3,以IPTG诱导表达.表达产物经变性、复性、QFF层析纯化后,测定其活性,并与溴化氰活化的Sepharose偶联合成亲和层析柱,纯化rtPA.结果 rserETI的表达量约占大肠杆菌菌体总蛋白的30%,复性率为80%,经QFF层析纯化后,蛋白浓度为1.58 mg/ml,SDS-PAGE检测显示无杂蛋白污染,纯度大于95%,对rtPA突变体的抑制比活性为4×104 IU/mg.偶联合成的rserETI-Sepharose亲和层析柱能特异性地纯化rtPA,rtPA突变体纯度达96%,比活性为5.07×105 IU/mg.结论 已成功构建了rserETI原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,制备的表达产物可用于rtPA的纯化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱美财	空军总医院临床检验中心	88	340	11.0	13.0
2	占志	空军总医院临床检验中心	24	77	5.0	7.0
3	蔡庆	空军总医院临床检验中心	57	189	6.0	10.0
4	王雅静	空军总医院临床检验中心	3	11	3.0	3.0