实时荧光定量PCR检测多鳍鱼Shh基因表达标准品质粒和标准曲线的构建

• 作者: 刘群 张昌盛 李湘涛 王俊杰 翟红
• 来源期刊: 科技导报
• 学科: 生物学
• 关键词: Shh基因 实时荧光定量PCR 标准曲线 多鳍鱼
• 年，卷（期）: 2007,（13）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 41-44
• 页数: 4页
• 分类号: Q341|Q959.46
• 字数: 3079字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-7857.2007.13.009

摘要

为了快速、准确定量多鳍鱼Shh基因在机体组织中的表达水平,根据笔者克隆的Shh基因序列,选择其高度保守区域设计-对引物,对多鳍鱼各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α.筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明Shh基因保守区段已经成功克隆.将重组标准品质粒进行倍比稀释,然后以此为模板,进行荧光定量PCR,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.回归方程为y=-0.32x+10.47,回归系数为1.00.构建Shh基因表达检测标准品质粒和标准曲线,建立检测多鳍鱼Shh基因荧光定量PCR方法,为进一步研究Shh基因在组织中的动态分布和研究多鳍鱼系统发育奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘群	中国农业大学动物医学院	64	836	17.0	27.0