结核分枝杆菌rv3873基因原核表达载体的构建、表达和纯化

• 作者: 刘忠泉 古淑香 张宗德 李自慧 杜博平 贾红彦 邢爱英 陈曦 马玙 黄海荣
• 来源期刊: 国际呼吸杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 rv3873基因 Rv3873重组蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（17）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1292-1295
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 4191字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-436X.2007.17.004

摘要

目的 构建结核分枝杆菌(M.tb)rv3873基因原核表达载体并进行表达.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增MTB rv3873基因,并克隆入pGEM(R)-T Easy质粒.测序正确后,再亚克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv3873重组体.结果 以重组体分别转化DH5α和BL21(DE3)菌后,经0.4mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,pET30a(+):rv3873表达出相对分子质量为47 000左右的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4 h重组蛋白的表达量最高.表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中,表达量占全菌蛋白质的50%,Western blot证实其具有良好的抗原性.经Ni-NTA柱纯化,获得纯度为90%的重组蛋白.结论 成功地构建原核表达载体pET30a(+):rv3873,并获得重组Rv3873蛋白,为辅助诊断结核菌的感染奠定了基础.