大鼠RVLG cDNA的克隆、原核表达和小鼠抗RVLG蛋白多克隆抗体的制备

• 作者: 乌日嘎 刘志达 包晓红 张平 李舜尧 王连庆 邢万金
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 医学
• 关键词: RVLG 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1981-1987
• 页数: 7页
• 分类号: R3
• 字数: 5701字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2008.11.021

摘要

为了识别大鼠卵巢中的生殖细胞,在原核系统中表达和纯化RVLG蛋白并制备了多克隆抗体.采用RT-PCR方法从大鼠睾丸组织中扩增获得RVLG cDNA片段,然后克隆到pMD19-T载体上进行测序,经双酶切回收目的基因片段后,将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1上,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.纯化后的GST-RVLG融合蛋白免疫昆明(KM)小鼠,最后给小鼠腹腔注射S180细胞制备抗RVLG腹水多克隆抗体.用Western blotting及免疫组织化学法鉴定RVLG腹水多克隆抗体的特异性,间接ELISA法测定该抗体的效价.序列分析表明,所克隆的RVLG cDNA片段比GenBank中报道的大鼠RVLG cDNA(NM_001077647)多60 bp,原因是由于RVLG的可变剪切方式造成的.本研究成功构建了重组表达质粒pGEX-RVLG,且GST-RVLG融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的10%以上.制备的抗体可特异性识别RVLG蛋白,其效价达1:20 000.获得的高效价、高特异性的小鼠抗RVLG蛋白腹水多克隆抗体为下阶段研究RVLG的特异性表达奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张平	内蒙古大学生命科学学院生物系	3	11	1.0	3.0
2	邢万金	内蒙古大学生命科学学院生物系	43	217	9.0	13.0
3	王连庆	内蒙古大学生命科学学院生物系	2	10	1.0	2.0
4	包晓红	内蒙古大学生命科学学院生物系	4	29	3.0	4.0
5	乌日嘎	内蒙古大学生命科学学院生物系	3	12	1.0	3.0
6	李舜尧	内蒙古大学生命科学学院生物系	3	15	2.0	3.0
7	刘志达	内蒙古大学生命科学学院生物系	1	10	1.0	1.0