sCR1在原核中表达、纯化、复性及活性鉴定

• 作者: GONG Cui-cui 刘亚利 刘珊 王广兰 王文丽 王轩 陈雷 高天蓝
• 来源期刊: 实用医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 可溶性补体受体1型 原核表达载体 包涵体 纯化 复性 生物学活性
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 970-973,977
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 5505字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4008.2008.08.052

摘要

目的 采用原核表达载体pET28a在E.coli BL21(DE3)中获得高表达、高活性的重组人sCR1融合蛋白.方法 从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长CDNA,将其克隆入原核表达载体pET28a中,构建含人sCR1的重组质粒(pET28a-sCR1),经测序鉴定正确,转化入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定.通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后进行复性及生物学活性鉴定.结果 获得原核表达载体pET28a-sCR1,经PCR鉴定及测序鉴定,得到重组E.coli BL21(DE3)克隆菌株,经IPTG诱导含有pET28a-sCR1的E.coli BL21(DE3)克隆菌,表达出重组人sCR1融合蛋白.此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr大于29 000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆单抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化、复性后得到高纯度的sCR1融合蛋白表达及较高的生物学活性.结论 人sCR1融合蛋白在E.coli BL21(DE3)表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原性及其生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王广兰	153医院济南军区检验中心	7	11	2.0	3.0
2	刘亚利	153医院济南军区检验中心	3	8	1.0	2.0
3	王文丽	153医院济南军区检验中心	6	17	3.0	4.0
4	王轩	153医院济南军区检验中心	2	8	1.0	2.0
5	GONG Cui-cui	153医院济南军区检验中心	1	7	1.0	1.0
6	高天蓝	153医院济南军区检验中心	1	7	1.0	1.0
7	刘珊	155医院检验科	1	7	1.0	1.0