突变型大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基基因的克隆表达与包涵体的复性

• 作者: 徐燕
• 来源期刊: 山东医学高等专科学校学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 酒石酸脱氢酶β亚基 PCR定点突变 诱导表达 复性
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-9,封3
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2430字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-0947.2008.01.002

摘要

目的 利用生物工程相关技术,获得不含Cys的突变型大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基,为下一步蛋白质交联奠定基础.方法 利用PCR定点突变技术扩增目的 基因,并将之克隆到质粒PGM-T,转化大肠杆菌DH5α.经测序证明序列无误后,将之与表达载体pTrcHisC连接,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达.目的 蛋白用TALON金属亲和树脂纯化,通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性.结果 通过SDS-PAGE分析,确定目的 蛋白以包涵体形式存在.复性产率可达70 %.结论 此次实验所得到的目的 蛋白的纯度与活性均满足蛋白质交联的需要.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐燕		14	20	3.0	4.0