环亚酰胺水解酶在大肠杆菌中的重组表达与纯化

• 作者: 史鹏 张学尧 王丽丽 石亚伟
• 来源期刊: 山西大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 环亚酰胺水解酶 亲和层析 人鼻病毒3C蛋白酶 疏水层析
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学与环境科学
• 页码范围: 252-257
• 页数: 6页
• 分类号: Q814
• 字数: 4453字
• 语种: 中文

摘要

以重组质粒pEI为模板,PCR扩增环亚酰胺酶基因序列,插入pMAL-s表达载体中.重组质粒转入E.Coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导可溶性表达融合蛋白MBP-CIH,利用Amylose亲和柱一步纯化获得MBP-CIH,再经人鼻病毒3C蛋白酶切除亲和臂MBP,硫酸铵沉淀、Phenyl-Sepharose疏水层析获得电泳纯的CIH,纯化倍数为12.7,活力回收29%,比活为36.3 U/mg.重组环亚酰胺水解酶的最适pH为8.0～9.0,最适温度50 ℃,在温度低于55 ℃时酶的性质相对稳定.Ni2+、Co2+能显著提高酶活力,Mn2+、Ca2+和Mg2+对酶活没明显有影响,Cu2+、Zn2+、Cd2+、Fe2+以及金属螯合剂8-羟基喹啉、EDTA则对酶有不同程度的抑制作用.初步说明该酶是一个金属依赖性酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史鹏		1	4	1.0	1.0
2	张学尧		1	4	1.0	1.0
3	王丽丽		1	4	1.0	1.0
4	石亚伟		2	6	2.0	2.0