人精子特异性乳酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达及其初步应用

• 作者: CHEN Ping LAN Feng-hua 吴玉水 涂向东 辛娜 黄梁浒
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: L-乳酸脱氢酶 同工酶类 精子 自身抗体 大肠杆菌 重组蛋白质类
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 933-936
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-9158.2008.08.025

摘要

目的 构建人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-CA)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,将重组hLDH-CA应用于抗精子抗体(ASA)的检测.方法 以人睾丸TripIEx cDNA文库为模板,PCR扩增hLDH-CA编码序列.PCR产物经Hind Ⅲ-Xho I酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BL21(DE3)中诱导His-Tag融合的重组蛋白表达.用免疫印迹、酶活性测定等方法鉴定表达产物.以纯化的重组hLDH-CA为基质,建立检测ASA的ELISA方法.结果 构建了hLDH-C4原核表达载体pET-28a(+).hLDHC.在IPTG的诱导下,重组菌可高效表达相对分子质量35 000的产物,与预期大小相符.免疫印迹显示,重组蛋白可被抗His-Tag单克隆抗体和兔抗人LDH-C4抗体识别.重组菌在IPTG诱导后,其裂菌液的乳酸脱氢酶活性是诱导前的11.2倍.用基于hLDH-C4抗原的间接ELISA法,在一组不育症患者中检测血清抗hLDH-CA抗体,阳性率达30.51%.结论 成功地克隆了hLDH-C4编码序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效的表达,重组hLDH-C4在ASA检测中得到初步应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	涂向东	南京军区福州总医院分子医学研究中心	46	140	6.0	10.0
2	辛娜	福建省肿瘤医院检验科	6	24	3.0	4.0
3	吴玉水	南京军区福州总医院分子医学研究中心	19	111	5.0	10.0
4	黄梁浒	南京军区福州总医院分子医学研究中心	34	222	6.0	14.0