青稞脱水素基因dhn4的克隆与原核表达

• 作者: 冯鸿 刘自礼 孙歆 席德慧 杜俊波 林宏辉 王尚英 王建辉 薛立微 袁澍
• 来源期刊: 四川大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 青稞 脱水素 克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 441-445
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4056字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0490-6756.2008.02.048

摘要

用RT-PCR的方法从重要的高原作物青稞(Hordeum vulgare L.vat.nudum Hook.f.)中克隆到了脱水素基因dhn4,其编码区长为678 bp,所编码的蛋白质DHN4为YSK2型脱水素.经预测,该蛋白二级结构易形成α-螺旋,并无固定的三级结构.将dhn4基因cDNA编码区定向克隆到载体PEW30-c上,获得了重组质粒PET-dhn4,该重组质粒再转化到大肠杆菌BL21茵株,37℃经1.5 mmol/L IPTG诱导获得了大量分子量约为35 kD的融合蛋白.然后用亲和层析的方法对该蛋白进行纯化,得到了纯化的脱水素DHN4蛋白.