二硫键稳定的抗HIV-1 gp41单链抗体的构建及原核表达

• 作者: 于源华 于芳 佟敬山 刘玉生 张钰 李昌 李霄 胡宁宁 金宁一
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人免疫缺陷病毒 gp41 单链抗体 原核表达 稳定性
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 169-173
• 页数: 5页
• 分类号: Q786|R512.91
• 字数: 4132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2008.03.001

摘要

目的 构建二硫键稳定的抗HIV-1gp41单链抗体(dsFv)基因原核表达载体,并进行表达和鉴定.方法 采用PCR定点突变的方法,构建含二硫键稳定的抗HIV-1gp41单链抗体突变基因质粒pUC57-d41,BamHI和HindⅢ双酶切后,定向插入pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE、Western blot鉴定表达产物.对目的 蛋白进行纯化和复性,并进行抗原结合活性及相对稳定性检测.结果 重组载体pET-d41经酶切鉴定,证实构建正确.表达产物相对分子质量约为28 000,与理论预期值完全相符.目的 蛋白最高表达量可占菌体总蛋白的45.48%.经Ni-NTA亲和层析法纯化并复性后,蛋白纯度达95%以上,抗HIC-1gp41 dsFv具有抗原结合活性,稳定性优于scFv.结论 已成功构建了二硫键稳定的抗HIV-1gp41单链抗体(dsFv)基因原核表达载体,并获得表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.