人NOD8基因启动子绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定

• 作者: 孙丽萍 曾琪 胡巢凤 陆大祥
• 来源期刊: 暨南大学学报(自然科学与医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 核苷酸结合寡聚化结构域8启动子(NOD8启动子) 载体 绿色荧光蛋白 基因表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 128-132
• 页数: 5页
• 分类号: R730.23
• 字数: 3969字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2009.02.003

摘要

目的:构建人NOD8基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体.方法:用特定的限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD8基因启动子不同长度2段序列,并进行酶切以切除启动子的pEGFP-C2作框架结构,插入表达载体pEGFP-C2中,构建含有人NOD8基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-NOD8(520 bp)、pEGFP-C2-NOD8(760 bp),用Vsp Ⅰ和Nhe Ⅰ双酶切和PCR鉴定重组质粒,再将重组质粒进行DNA序列分析.构建的重组质粒经脂质体(lipofectamine)TM2000介导转染HEK293、K562和HeLa细胞,转染48 h后在倒置荧光显微镜下观察.结果:pEGFP-C2-NOD8(520 bp)、pEGFP-C2-NOD8(760 bp)分别经酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,构建的2段重组质粒转染HEK293、K562及HeLa细胞均能表达绿色荧光,其中构建的pEGFP-C2-NOD8(760 bp)重组质粒绿色荧光表达强于pEGFP-C2-NOD8(520 bp).结论:成功构建2段不同长度的人NOD8基因启动子绿色荧光蛋白表达载体.