Dystrophin基因缺失检测微阵列构建及应用中技术优化的研究

• 作者: 万琪 吴保仁 张改华 杜文津
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DNA微阵列 Dystrophin基因 DMD/BMD 条件优化
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 分子、生化遗传学与PCR技术
• 页码范围: 25-27
• 页数: 3页
• 分类号: R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 建立Dystrophin基因缺失检测的DNA微阵列技术,并优化其构建及应用中的关键技术条件.方法 提取样品基因组DNA,Klenow法随机引物扩增同时FITC荧光标记,并比较生物素标记法.将FITC荧光标记的核酸点样于不同方法活化处理的玻片上并用不同浓度的盐溶液洗脱,测试对DNA固定效率的影响.以分子克隆法获得的Dystrophin基因18个易缺失外显子cDNA片段为探针、APES和poly-Lys联合处理的玻片为基片,制备简易微阵列.分别与DMD/BMD患者及健康人荧光标记的基因组DNA杂交,检测微阵列的质量和评估结果的可靠性.结果 APES和poly-Lys联合处理的玻片对核酸固定效率最高,核酸在洗涤过程中的脱落程度随洗液盐浓度的增加而增大;FITC标记步骤简便,生物素标记相对烦琐,但生物素标记杂交后的荧光强度明显高于FITC标记;微阵列杂交信号信噪比较好,各种对照结果满意,检测结果与PCR一致.结论 优化了DNA微阵列构建及应用过程中基片表面活化、探针固定、靶基因DNA扩增标记、杂交条件、杂交信号检测分析等方法,为更好地应用微阵列进行Dystrophin基因诊断奠定基础.