犊牛盲肠微生物总DNA的提取方法

• 作者: 于萍 刘开朗 卜登攀 周凌云 王加启 邓露芳 魏宏阳
• 来源期刊: 乳业科学与技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 犊牛盲肠微生物 细菌总DNA PCR扩增 超声波细胞破碎 反复珠磨法
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 14-16
• 页数: 3页
• 分类号: Q781
• 字数: 2768字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-5187.2009.01.004

摘要

采用反复冻融法、玻璃珠法和超声波+反复珠磨的方法提取犊牛盲肠的微生物总DNA,并对以上三种方法进行比较,从中确定最佳的方法,以实现普通实验条件下成功提取符合PCR扩增要求的DNA.经紫外分光光度分析表明,超声波+反复珠磨的方法所得的DNA的A<,260>/A<,280>的比值为1.81,0.8%琼脂糖凝胶电泳结果显示,所提DNA片段分子量大于20 kb,适于酶解和PCR扩增要求.以提取的DNA样品为模板,利用细菌通用引物,对其16S rDNA进行PCR扩增,获得了1.7 kb大小特异性很好的预期条带.这是研究犊牛盲肠微生物的关键一步.