M-CSF核内稳定表达细胞系的构建和鉴定

• 作者: 唐圣松 张晓红 涂剑 滕淑静 赵雪琴
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 巨噬细胞集落刺激因子 pCMV/myc/nuc载体 HeLa细胞
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 622-624
• 页数: 3页
• 分类号: R363
• 字数: 2185字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2009.03.047

摘要

目的:构建真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立M-CSF核内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的核内作用奠定基础.方法:采用PCR扩增人M-CSF活性片段,将M-CSF片段插入真核表达载体pCMV/myc/nuc,强制性把M-CSF引入细胞核内,通过PCR、测序鉴定筛选阳性重组体pCMV/M-CSF,脂质体介导转染HeLa细胞,经G418筛选后,用RT-PCR、间接免疫荧光鉴定其在HeLa细胞中的表达及定位分布.结果:琼脂糖电泳结果显示插入片段为1 400 bp左右,与预期M-CSF分子大小相当;DNA测序分析表明插入质粒的M-CSF无读码框移位,并与来源序列一致.RT-PCR和间接免疫荧光检测表明,转染pCMV/M-CSF的HeLa细胞能稳定表达M-CSF mRNA与M-CSF蛋白,且表达的M-CSF定位于HeLa细胞的细胞核.结论:成功构建了真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立了M-CSF核内稳定表达细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张晓红	南华大学岳阳职业技术学院	29	107	6.0	9.0
2	涂剑	南华大学药物药理研究所	41	102	5.0	8.0
3	唐圣松	南华大学药物药理研究所	65	332	11.0	16.0
4	滕淑静	南华大学岳阳职业技术学院	2	4	2.0	2.0
5	赵雪琴	南华大学药物药理研究所	2	7	2.0	2.0