复苏促进因子Rpf结构域突变体蛋白的原核表达和纯化

• 作者: 吕韶敏 岳晨莉 杨晓燕 王陵
• 来源期刊: 武警医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 藤黄微球菌 Rpf结构域 突变体 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 832-834,837
• 页数: 4页
• 分类号: Q51
• 字数: 1907字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建藤黄微球菌复苏促进因子Rpf结构域突变体基因E54K、E54A的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达和纯化.[方法]采用PCR方法从藤黄微球菌基因组中扩增出Rpf结构域F,54A、E54K突变体基因,连接进入pMD-18T载体中,测序正确的基因插入到pGEX-4T-1表达载体中,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定表达蛋白,利用Rpf结构域单克隆抗体进行Western-blotting分析.用GS-4B亲和层析柱纯化目的蛋白.[结果]获得藤黄微球菌Rpf结构域E54K和E54A突变体基因,测序结果与GenBank公布的序列相同,突变体位点与设定一致;表达蛋白相对分子质量与文献报道一致;Western-blotting结果显示,在相对分子量约32 KD处有与Rpf结构域单克隆抗体特异性结合带.通过GS-4B系统,得到纯化的GST融合蛋白.[结论]成功表达、纯化了Rpf结构域突变体E54K、E54A融合蛋白,为上述蛋白在结核病中的应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕韶敏	武警陕西总队医院呼吸科	34	105	5.0	8.0
2	岳晨莉	武警陕西总队医院呼吸科	21	84	5.0	8.0
3	杨晓燕	武警陕西总队医院呼吸科	32	118	7.0	10.0
4	王陵	武警陕西总队医院呼吸科	22	79	5.0	8.0