PCR靶向克隆法构建携带人类神经生长因子β基因的含有EGFP的重组腺病毒穿梭质粒

• 作者: 王家宁 王清秀 肖敏 谢华 黄永章
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 靶向克隆 穿梭质粒 神经生长因子
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法学研究
• 页码范围: 212-215,插2
• 页数: 5页
• 分类号: R786
• 语种: 中文

摘要

目的:在靶向克隆酶的作用下,利用PCR靶向克隆构建携带人神经生长因子的重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-hNGFβ-EGFP.方法:按PCR引物设计原则设计两条引物,分别在上下游引物的5'端加上12个碱基与线性化载体切口两端同源载体序列,引物合成后PCR反应扩增目的基因hNGF-β,提纯后与EcoRV酶切的穿梭质粒pShuttle-IRES-hrEGFP在靶向克隆酶(LP Recco enzyme)的作用下37℃孵育15 min,转化感受态大肠杆菌,碱裂解法制备及纯化质粒DNA.结果:EcoRV酶切鉴定证实pShuttle-hNGFβ-EGFP构建成功.结论:在不需要限制性内切酶的情况下用靶向克隆酶连接可快速、准确得到穿梭质粒pShuttle-hNGFβ-EGFP.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王家宁	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
2	黄永章	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	66	379	11.0	16.0
3	肖敏	郧阳医学院附属太和医院急诊科	27	104	5.0	9.0
4	谢华	郧阳医学院附属太和医院急诊科	4	12	2.0	3.0
5	王清秀	同济大学附属东方医院麻醉科	26	102	5.0	9.0