GFP-Rv2626c融合蛋白表达载体的构建及表达纯化

• 作者: 张辉 曹旭东 王远志 陈创夫
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Rv2626c GFP 原核表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 361-364
• 页数: 4页
• 分类号: S852.61|Q78
• 字数: 3570字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2009.04.017

摘要

目的 构建含Rv2626c基因的原核表达载体,获得GFP-Rv2626c融合蛋白,为今后开发鉴别结核感染的血清学诊断试剂打下基础.方法 以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,经PCR法扩增得到Rv2626c基因DNA 片段.将扩增片段克隆到pGM-T载体中测序,并进一步将Rv2626c亚克隆到pET28a-GFP中,构建原核重组表达载体pET28a-GFP-Rv2626c.将pET28a-GFP-Rv2626c转化E.coli BL21(DE3),用IPTG 诱导目的 基因表达,经SDS-PAGE和Western-blot 分析和纯化该表达产物.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定,成功构建了重组质粒pET28a-GFP-Rv2626c.用IPTG诱导该质粒转化的E.coli BL21后,获得分子量约46kD的GFP-Rv2626c融合蛋白.经Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的GFP-Rv2626c融合蛋白.结论 成功制备出重组GFP-Rv2626c融合蛋白,为开发鉴别结核感染的血清学诊断试剂打下了基础.