人CLEC-2胞外段CRD重组蛋白纯化与多克隆抗体的制备和活性鉴定

• 作者: 吴兴中 吴维宾 李因涛 杨俊武 洪谊 王文忠 谢建辉
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: C型凝集素样蛋白 糖类识别结构域 重组质粒 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1012-1018
• 页数: 7页
• 分类号: R392|Q7
• 字数: 5337字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00042

摘要

人C型凝集素样受体(human C-type lectin-like receptor-2,hCLEC-2)是新克隆的Ⅱ型跨膜受体分子,研究表明,它在病毒感染,血小板活化、聚集,肿瘤转移和信号转导等方面发挥重要作用.通过制备针对其胞外段糖类识别结构域(CRD)的抗体来进一步研究该蛋白质的生物学功能及相关信号通路.构建了pET23b-CRD重组表达质粒,将其转化到大肠杆菌BL21中,用于hCLEC-2-CRD-His融合蛋白的表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明,融合重组蛋白成功获得了高效表达,分子质量在18 ku左右.经鉴定,发现hCLEC-2-CRD-His表达于包涵体中.为获得高纯度的可溶性蛋白,将包涵体溶于6 mol/L盐酸胍,并用镍柱进行纯化.纯化后的蛋白质经过透析、再折叠后作为抗原,免疫家兔制备抗血清,抗血清经蛋白G亲合层析纯化后用westem blot等方法进行鉴定,结果显示该抗体能特异性地检测到GFP-hCLEC-2和GFP-CRD.通过使用该抗体,进一步发现,在用PMA和IL-4诱导单核细胞THP-1分化的过程中,内源性hCLEC-2蛋白水半下调,初步揭示了hCLEC-2的表达和单核细胞的分化存在一定的联系.因此,该抗体的成功制备将为进一步研究CLEC-2的生物学功能提供有利的条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴兴中	复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系	18	118	5.0	10.0
2	李因涛	复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系	1	2	1.0	1.0
3	吴维宾	复大学上海医学院基因中心	1	2	1.0	1.0
7	洪谊	复大学上海医学院基因中心	1	2	1.0	1.0
8	王文忠	复大学上海医学院基因中心	1	2	1.0	1.0
9	杨俊武	复大学上海医学院基因中心	1	2	1.0	1.0
10	谢建辉	复大学上海医学院基因中心	1	2	1.0	1.0