人MDC1基因shRNA反转录病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 刘涛 刘革力 卜友泉 宋方洲 易发平 程莉 袁成福 黄秀凝
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: psiRNA-MDC1反转录病毒载体 MDC1基因 宫颈癌
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 441-444
• 页数: 4页
• 分类号: R739.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.04.020

摘要

目的 建立反转录病毒介导的MDC1基因RNA干扰表达体系并观察其在官颈癌细胞(HeLa)中对MDC1表达的影响.方法 将人MDC1基因的RNA干扰双链DNA片段重组到反转录病毒质粒pSilencer5.1-H1 Retro中,构建携带人MDC1基因的RNA干扰反转录病毒载体psiRNA-MDC1.经PT67细胞包装后,产生的莺组反转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定的细胞克隆.采用RT-PCR和Western blotting检测细胞中MDC1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 重组psiRNA-MDC1质粒经测序鉴定正确;重组反转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western blotting检测人MDC1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未十扰组.结论 携带人MDC1基因RNA干扰双链DNA片段的反转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MDC1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MDC1在宫颈癌中的作用奠定了基础.