淋病奈瑟菌pIB基因的克隆、原核表达及其表达产物免疫学鉴定

• 作者: 吴文纲 王桂英
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 淋病奈瑟菌 克隆 免疫学鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 临床检验
• 页码范围: 1068-1070
• 页数: 3页
• 分类号: R759.2
• 语种: 中文

摘要

目的:分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白pIB基因核苷酸及氨基酸序列,构建pIB基因的原核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性,检测标本中pIB基因的表达情况.方法:采用PCR扩增淋病奈瑟菌ATCCA9226株的全长pIB基因,T-A克隆测序后与GenBank中相应序列进行相似性比较并构建pIB基因的原核表达系统.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查目的重组蛋白rPIB表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rPIB.rPIB免疫家兔以了解其抗原性并采用免疫双扩散试验检测抗血清的效价.采用Western Blot检测rPIB的免疫反应性.建立PIB-ELISA检测标本中pIB基因的表达情况.结果:与GenBank中相应序列比较,克隆的pIB基因核苷酸和氨基酸序列完全相同.rPIB表达量为细菌总蛋白的21.5%,提纯的rPIB经SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带.rPIB能诱导家兔产生特异性抗体,其免疫双扩散效价为1:4.pIB+淋病奈瑟菌感染的病人血清能与rPIB产生阳性Western杂交条带.PIB-ELISA检测淋病病人的脓性分泌物标本的阳性率为82.3%.结论:结果表明本研究成功地克隆并构建淋病奈瑟菌pIB基因及其原核表达系统,该表达系统能有效地表达rPIB.rPIB有良好的抗原性和免疫反应性,rPIB免疫家兔制备的抗血清特异性高.可作为研制淋病基因工程疫苗及实验室诊断方法的侯选抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王桂英		3	0	0.0	0.0
2	吴文纲		2	0	0.0	0.0