mBD1-mBD3融合基因真核表达载体构建及体外抗流感病毒初步研究

• 作者: 冯伟 冯艳 张强 李婉宜 李明远 杨远 江滟 王保宁 王月玲 蒋忠华
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: mBD1-mBD3 RT-PCR 真核表达 免疫荧光 重叠-PCR TCID50
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 1072-1075
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3111字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2009.07.002

摘要

目的 构建小鼠β-防御素1和β-防御素3(mBD1,mBD3)融合基因的真核表达载体,研究mBD1-mBD3融合蛋白的抗流感病毒作用.方法 通过RT-PCR和重建PCR方法构建mBD1-mBD3融合基因;经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后插入相同酶切的pcDNA3.1(+),构建成重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-mBD3,对重组质粒进行PCR、酶切和测序鉴定;将构建好的真核表达载体转染MDCK细胞,G418筛选稳定表达株,RT-PCR和免疫荧光染色法鉴定胞内mBD1-mBD3的表达.用流感病毒感染稳定表达细胞株,TCID50测定并分析抗流感病毒作用.结果 成功克隆到mBD1-mBD3基因,并构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/mBD1-mBD3.RT-PCR和间接免疫荧光证实重组质粒可以在细胞内表达.实验组的TCID50显著高于对照组,初步显示出mBD1-mBD3的抗流感病毒作用.结论 本研究成功构建了pcDNA3.1(+)/mBD1-mBD3真核表达载体,且能在MDCK细胞中稳定表达,表达产物具有一定的抗流感病毒作用.为进一步深入研究mBD1-mBD3的生物学特性及其抗流感病毒作用机制奠定了基础.