融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)的构建及真核表达

• 作者: 布立敬 李红智 胡望雄 苏世振 隋文君
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: erbB2 融合基因 表达载体 肿瘤治疗
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 702-708
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

本研究利用SWISS-MODEL预测该融合蛋白的三级结构.利用PCR的方法分别从重组pPIC9k、重组pBullet和pSecTag2B上扩增出3段基因片段,即片段anti-erbB2 scFv(简称A)、片段Fc-CD28-CD3(ζ)(简称B)和信号肽序列(简称S).利用SOE-PCR将3段序列连接形成融合基因片段s-A-B.经TA克隆扩增及鉴定后,将融合基因片段与逆转录病毒表达载体pLNCX相连构建重组真核表达载体,电转染人淋巴瘤T细胞株Jurkat,G418筛选后用流式细胞术检测融合蛋白稳定表达情况.经预测在anti-erbB2 scFv与Fc基因片段之间不加连接肽的融合蛋白,在三级结构上可形成更佳的功能构象.经PCR、酶切及测序鉴定均证实成功构建重组真核表达载体pLNCX/S-A-B(在A与B基因片段之间不加linker).经流式细胞术检测,在转染的Jurkat细胞中融合蛋白表达率约为56.17%.本研究应用分子克隆的方法成功地构建了重组真核表达载体pLNCX/anti-erbB2 scFv-FcCD28-CD3(ζ),融合基因能够在淋巴瘤T细胞株中表达,为制备含该融合基因的原代T淋巴细胞,进行erbB2过表达肿瘤的靶向基因治疗研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李红智		25	118	5.0	10.0
2	隋文君		2	5	1.0	2.0
3	苏世振		2	2	1.0	1.0
4	胡望雄		1	0	0.0	0.0
5	布立敬		2	2	1.0	1.0