解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1的克隆、密码子优化及功能表达

• 作者: 刘云 张黎 徐莉 赵鹤云 闫云君
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1 克隆 密码子优化 GAP启动子 功能表达
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 970-975
• 分类号: Q93
• 语种: 中文

摘要

[目的]克隆解脂耶氏酵母(Yarrawia lipolytica)脂肪酶基因lip1,并通过密码子优化,首次实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的诱导型和组成型表达.[方法]通过PCR扩增Y. lipolytica脂肪酶基因lip1,根据P.pastoris密码子偏爱性,运用重叠延伸PCR合成改造后基因MLip1,将其分别克隆至诱导型分泌载体pPIC9K和新构建的组成型分泌载体pGAP9K上,电转至P.pastoris GS115中,G418抗性筛选得到高拷贝转化重组子,摇瓶发酵,以对硝基苯酚酯为底物检测脂肪酶水解活力,并对表达产物进行酶学性质分析.[结果]从Y. lipolytica中成功克隆了脂肪酶基因lip1(GenBank:Z50020),全长1461 bp,编码486个氨基酸残基,无内含子,无信号肽;密码子优化后基因表达水平相对于出发基因有较大提高,且组成型表达优于诱导型;Lip1酶学性质分析表明,其最适底物为pNPB(C4),45℃下Tris-Hcl缓冲液pH8.5时最大水解酶活为8.07 U/mL.[结论]Y. lipolytica脂肪酶基因lip1的克隆丰富了脂肪酶基因资源,其高效基因工程菌的构建为将来实现规模化生产奠定了技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫云君	分子生物物理教育部重点实验室华中科技大学生命科学与技术学院	8	102	6.0	8.0
2	刘云	分子生物物理教育部重点实验室华中科技大学生命科学与技术学院	5	72	4.0	5.0
3	赵鹤云	分子生物物理教育部重点实验室华中科技大学生命科学与技术学院	2	15	2.0	2.0
4	徐莉	分子生物物理教育部重点实验室华中科技大学生命科学与技术学院	5	61	4.0	5.0
5	张黎	分子生物物理教育部重点实验室华中科技大学生命科学与技术学院	1	11	1.0	1.0