癌钙调蛋白/鱼精蛋白截短体融合基因在原核表达载体中的构建及鉴定

• 作者: 崔志利 朱彤 石燕红 胡丹 薛铮 马丽娜
• 来源期刊: 眼科研究
• 学科: 医学
• 关键词: 癌钙调蛋白 鱼精蛋白 融合基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 401-405
• 分类号: R774.03
• 字数: 3760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-0808.2010.05.006

摘要

目的 在原核表达载体中构建癌钙调蛋白(OM)/鱼精蛋白截短体(tp)融合基因,进行基因测序鉴定.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬细胞,并进行细胞计数,经巨噬细胞特异性抗体CD68鉴定.设计引物扩增OM基因,并在其3'端引入tp的编码基因,经PCR扩增获得OM/tp融合基因,通过中间载体PUC57进行目的基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体PET32a连接,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,小量提取质粒,送样经公司测序鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳获得OM/tp目的基因,与预期的目的基因大小一致,回收目的基因与中间载体PUC57连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒PUC57-OM/tp,经测序鉴定后与预期的序列一致.质粒PUC57-OM/tp酶切后与载体PET32a连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR获得约500 bp的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒PET32a-OM/tp经测序后与预期的序列一致.结论 OM/tp融合基因的成功构建,为该融合蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡丹	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	44	228	9.0	12.0
2	崔志利	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	12	74	5.0	8.0
3	石燕红	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	2	2	1.0	1.0
4	朱彤	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	3	5	2.0	2.0
5	马丽娜	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	7	14	2.0	3.0
6	薛铮	第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所	1	2	1.0	1.0