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摘要:
目的 在原核表达载体中构建癌钙调蛋白(OM)/鱼精蛋白截短体(tp)融合基因,进行基因测序鉴定.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬细胞,并进行细胞计数,经巨噬细胞特异性抗体CD68鉴定.设计引物扩增OM基因,并在其3'端引入tp的编码基因,经PCR扩增获得OM/tp融合基因,通过中间载体PUC57进行目的基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体PET32a连接,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,小量提取质粒,送样经公司测序鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳获得OM/tp目的基因,与预期的目的基因大小一致,回收目的基因与中间载体PUC57连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒PUC57-OM/tp,经测序鉴定后与预期的序列一致.质粒PUC57-OM/tp酶切后与载体PET32a连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR获得约500 bp的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒PET32a-OM/tp经测序后与预期的序列一致.结论 OM/tp融合基因的成功构建,为该融合蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础.
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文献信息
篇名 癌钙调蛋白/鱼精蛋白截短体融合基因在原核表达载体中的构建及鉴定
来源期刊 眼科研究 学科 医学
关键词 癌钙调蛋白 鱼精蛋白 融合基因 原核表达
年,卷(期) 2010,(5) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 401-405
页数 分类号 R774.03
字数 3760字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1003-0808.2010.05.006
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 胡丹 第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所 44 228 9.0 12.0
2 崔志利 第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所 12 74 5.0 8.0
3 石燕红 第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所 2 2 1.0 1.0
4 朱彤 第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所 3 5 2.0 2.0
5 马丽娜 第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所 7 14 2.0 3.0
6 薛铮 第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所 1 2 1.0 1.0
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鱼精蛋白
融合基因
原核表达
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中华实验眼科杂志
月刊
2095-0160
11-5989/R
大16开
郑州市纬五路7号河南省眼科研究所&河南省立眼科医院院内
36-13
1980
chi
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