内生解淀粉芽胞杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bglS)的克隆与表达及酶学特性分析

• 作者: 关雄 胡方平 范晓静 邱思鑫
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 内生解淀粉芽胞杆菌 β-1,3-1,4-内切葡聚糖酶基因(bglS) 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1173-1181
• 分类号: S8
• 字数: 7222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.06.022

摘要

β-1,3-1,4-内切葡聚糖酶普遍存在于植物内生芽胞杆菌中,为了探讨其功能,以内生解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)TB2菌株基因组为模板,克隆了β-1,3-1,4-内切葡聚糖酶基因(bglS).测序结果表明,该基因的ORF全长732 bp,编码一条243个氨基酸的蛋白,理论分子量约为27.33 kD,等电点约为6.89,其ORF序列已登录GenBank(Accession No.EU368224).Blast同源性分析结果表明,该基因的ORF序列与植物互作生防解淀粉芽胞杆菌(B.amyloliquefaciens FZB42,GenBank Accession No.CP000560)的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因核苷酸序列的一致性达97.3%,氨基酸序列的一致性达97.1%.将β-1,3-1,4-内切葡聚糖酶基因全长克隆至pUC18载体上,利用基因自身的启动子构建重组表达载体pUC-bglS,并导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中表达.SDS-PAGE分析表明,BL21::pUC-bglS菌株表达了27 kD左右的蛋白;该酶的最适反应温度为55℃,在50℃以下保温60 min后残余80%以上酶活;最适反应pH为6.2,在pH4.4～6.8 4℃保温30 min残余85%以上的酶活;Ca2+和Fe肛可提高β-1,3-1,4-葡聚糖酶的活性,而Cu2+、Zn2+、Mg2+和Mn2+对其活性具有显著的抑制作用.实验结果为进一步研究植物内生解淀粉芽胞杆菌TB2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的功能和应用打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡方平	福建农林大学植物保护学院	78	2461	27.0	48.0
2	关雄	福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室	112	2066	21.0	43.0
3	邱思鑫	福建省农业科学院作物研究所蔬菜研究中心	36	367	10.0	17.0
4	范晓静	福建农林大学植物保护学院	14	160	8.0	12.0