含KSHV vIL-6基因原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与鉴定

• 作者: 卢春 王平 葛高霞
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 病毒白细胞介素6基因 原核表达 融合蛋白 卡波济肉瘤相关疱疹病毒
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 检验医学
• 页码范围: 244-247
• 分类号: R392.13
• 字数: 3662字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2010.03.015

摘要

目的:在大肠埃希菌中表达卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)vIL-6基因,并进一步纯化和鉴定表达蛋白.方法:以本实验室已构建的重组质粒pGEX-6p-1-vIL-6为模板,PCR扩增目的基因片段,将PCR产物克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建vIL-6的重组原核表达质粒pET-32a(+)-vIL-6.将重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.表达产物通过镍亲和层析柱纯化并经蛋白质印迹法鉴定.结果:限制性内切酶检测和基因测序证实,成功构建了含有vIL-6基因的原核表达载体.蛋白质印迹法结果显示,在大肠埃希菌BL21(DE3)中His-Tag融合蛋白得到了表达,亲和层析法纯化后获得了相对分子质量为43 000的vIL-6融合蛋白.结论:重组质粒pET-32a(+) -vIL-6能在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,利用镍亲和层析柱可纯化获得融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春	南京医科大学微生物学与免疫学系	92	236	7.0	9.0
2	王平	南京医科大学微生物学与免疫学系	48	276	9.0	14.0
3	葛高霞	南京医科大学第一附属医院检验科	15	72	6.0	8.0